A Baltimore and Ohio Railroad (marcas B&O, BO) foi a primeira ferrovia de transporte comum e a ferrovia mais antiga dos Estados Unidos, com sua primeira seção aberta em 1830. Comerciantes da cidade de Baltimore, que se beneficiaram até certo ponto da construção da Estrada Nacional no início do século, queria continuar a competir pelo comércio com os colonos trans-Appalachian com o Albany-Schenectady Turnpike construído em 1797, e o recém-construído Canal Erie, inaugurado em 1825, (ambos servindo Nova York City), outro canal sendo proposto pela Pensilvânia (que teria conectado Filadélfia e Pittsburgh), o Canal Chesapeake e Ohio (C&O, que se conectava à capital do país, Washington, DC, embora nunca tenha chegado a Ohio) e o Canal do Rio James , que direcionava o tráfego para Richmond e Norfolk, Virgínia. A princípio, o B&O estava localizado inteiramente no estado de Maryland, sua linha original se estendia do porto de Baltimore a oeste até Sandy Hook (inaugurado em 1834). Lá ele se conectava com Harper's Ferry (de barco, depois pela Wager Bridge) através do Potomac até a Virgínia, e também com o navegável rio Shenandoah.

Por causa da concorrência com o canal C&O para o comércio com campos de carvão no oeste de Maryland, a ferrovia não pôde usar o direito de passagem C&O a oeste de Harpers Ferry. Assim, para continuar para o oeste através das Montanhas Apalaches, a B&O optou por construir a B&O Railroad Potomac River Crossing (1837) em Harpers Ferry, Virgínia (desde 1863, West Virginia). A linha continuou através da Virgínia até um ponto a oeste da junção de Patterson Creek e o North Branch Potomac River, onde cruzou de volta para Maryland para chegar a Cumberland (1842), conectando-se à National Road, a principal rota para o oeste. Chegou ao rio Ohio em Moundsville, Virgínia (1852), Wheeling (1853), onde construiu um terminal, e alguns anos depois (1857) também a Parkersburg, Virgínia, abaixo de corredeiras que dificultavam a navegação durante partes do ano. Foi crucial para o sucesso da União durante a Guerra Civil Americana, embora o conflito também tenha causado danos consideráveis ​​e custos de reparo. Após o fim da guerra, a B&O consolidou várias linhas de alimentação na Virgínia e Virgínia Ocidental, além de se expandir para o oeste em Ohio (incluindo uma junção em Portsmouth), Indiana e Illinois. A publicidade da B&O mais tarde levou o lema: "Ligar 13 Grandes Estados com a Nação".

Após várias fusões, a B&O passou a fazer parte da rede CSX Transportation (CSX). A B&O também inclui a Leiper Railroad, a primeira ferrovia permanente puxada por cavalos nos EUA. e suas subsidiárias. Inclui a ponte ferroviária operacional mais antiga dos Estados Unidos.

Quando a CSX estabeleceu o B&O Railroad Museum como uma entidade separada da corporação, doou algumas das antigas lojas B&O Mount Clare em Baltimore, incluindo a rotunda de Mt. Clare, para o museu, enquanto vendia o resto da propriedade. O B&O Warehouse no entroncamento ferroviário Camden Yards em Baltimore agora domina a vista sobre a parede do campo direito na atual casa dos Baltimore Orioles, Oriole Park em Camden Yards.

Parte da imortalidade da B&O Railroad veio de ser uma das quatro ferrovias em destaque na versão original do jogo de tabuleiro Monopoly; é a única ferrovia no conselho que não serviu diretamente Atlantic City, Nova Jersey, a cidade que deu o nome aos lugares e nomes da edição original do Monopólio.